總RNA的提?。?Trizol 法提取 ）

在收集到生物材料之后，最好能即刻進行 RNA 制備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備 RNA 時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍 ，以避免 RNase 的作用。

1.提取組織 RNA 時，每50～100mg 組織用 1ml Trizol 試劑對組織進行裂解；提取細胞 RNA 時，先離心沉淀細胞，每 5-10 ╳106 個細胞加 1ml Trizol 后，反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞；

       2.將上述組織或細胞的Trizol 裂解液轉入EP管中,在室溫15~30C下放置 5 分鐘 ；

3. 在上述 EP 管中，按照每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量加入氯仿，蓋上 EP管蓋子，在手中用力震蕩 15 秒，在室溫下（15℃～30℃）放置 2～3 分鐘后，
12000g（2℃～8℃）離心 15 分鐘；

4. 取上層水相置于新 EP管中,按照每 1ml TRIZOL加 0.5ml 異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置 10 分鐘,12000g（2℃～8℃）離心 10 分鐘 ；

5.棄上清 ，按照每 1ml TRIZOL 加 1ml 75%乙醇進 行洗滌，渦 旋混合，7500g（2℃～8℃）離心 5 分鐘，棄上清；

6. 讓沉淀的 RNA 在室溫下自然干燥；

7.用 Rnase-free water 溶解 RNA 沉淀。